Cytometry and Cell Sorting Core Facility

Die Cytometry and Cell Sorting Core Facility stellt Forschenden modernste Technologien für die Durchflusszytometrie und das Zellsortieren zur Verfügung. Sie ist ausgestattet mit:

Analyzer (5)

  • Um möglichst viel Information aus einer Probe zu erhalten, steht der LSR Fortessa-A3 als Highend-Durchflusszytometer in der Core Unit zur Verfügung. Das Gerät bietet zu den 3 Standardlasern noch einen gelb-grünen und einen UV-Laser. Es können bis zu 29 Farbstoffe in einer Probe verwendet werden. Messungen können selbständig bzw. als Dienstleistung durch die Core Unit durchgeführt werden.

    Es ist die Bearbeitung folgender Proben möglich: S0, S1, S2. Es dürfen keine HIV-positiven oder Hepatitis-B oder -C positiven Proben gemessen werden. Daher müssen primäre humane Proben vorher darauf getestet werden oder die Proben müssen fixiert werden.

    Das Gerät ist mit folgenden Lasern ausgestattet:

    • 355 nm: UV-Laser
    • 405 nm: violetter Laser
    • 488 nm: blauer Laser
    • 561 nm: grüner Laser
    • 633 nm: roter Laser

  • Der Quanteon ist mit 4 Lasern ausgestattet. Die Besonderheit, die dieses Gerät bietet ist die Bestimmung von absoluten Zellzahlen. Außerdem enthält die Software Programme zur Erstellung von Zellzyklus- und Proliferationsanalysen. Dieser kann für Messungen mit einfachen Farbkombinationen selbstständig oder als Dienstleistung durch die Core Unit genutzt werden.

    Es ist die Bearbeitung folgender Proben möglich: S0, S1, S2. Es dürfen keine HIV-positiven oder Hepatitis-B oder -C positiven Proben gemessen werden. Daher müssen primäre humane Proben vorher darauf getestet werden oder die Proben müssen fixiert werden.

    Das Gerät ist mit folgenden Lasern ausgestattet:

    • 405 nm: violetter Laser
    • 488 nm: blauer Laser
    • 561 nm: gelb-grüner Laser
    • 637 nm: roter Laser

  • Zur Erweiterung des Messspektrums steht der LSR Fortessa als Durchflusszytometer in der Core Unit zur Verfügung. Das Gerät bietet zusätzlich einen gelb-grünen Laser an, wodurch eine bessere Detektion bei der Verwendung von PE-Farbstoffen und roten Fluoreszenzproteinen möglich ist. Es können bis zu 17 Farbstoffe in einer Probe verwendet werden. Messungen können selbständig bzw. als Dienstleistung durch die Core Unit durchgeführt werden.

    Es ist die Bearbeitung folgender Proben möglich: S0, S1, S2. Es dürfen keine HIV positiven oder Hepatitis-B oder -C positiven Proben gemessen werden. Daher müssen primäre humane Proben vorher darauf getestet werden oder die Proben müssen fixiert werden.

    Das Gerät ist mit folgenden Lasern ausgestattet:

    • 405 nm: violetter Laser
    • 488 nm: blauer Laser
    • 561 nm: grüner Laser
    • 640 nm: roter Laser

  • Zur Entlastung des A3 steht der LSR Fortessa 5L als Durchflusszytometer in der Core Facility zur Verfügung. Das Gerät bietet zusätzlich einen UV-Laser an. Es können bis zu 18 Farbstoffe in einer Probe verwendet werden. Messungen können selbständig bzw. als Dienstleistung durch die Core Facility durchgeführt werden.

    Es ist die Bearbeitung folgender Proben möglich: S0, S1, S2. Es dürfen keine HIV positiven oder Hepatitis-B oder -C positiven Proben gemessen werden. Daher müssen primäre humane Proben vorher darauf getestet werden oder die Proben müssen fixiert werden.

    Das Gerät ist mit folgenden Lasern ausgestattet:

    • 355 nm: UV-Laser
    • 405 nm: violetter Laser
    • 488 nm: blauer Laser
    • 561 nm: grüner Laser
    • 640 nm: roter Laser

  • Für hoch komplexe Applikationen steht der Aurora als Highend-Durchflusszytometer in der Core Facility zur Verfügung. Das Gerät bietet zu den 3 Standardlasern noch einen gelb-grünen und einen UV-Laser. Da es sich um ein Spektralgerät (64 Fluoreszenz-Kanäle + 3 Scatter-Kanäle) handelt, können auch Farbstoffe, die ähnliche Emissionsspektren haben getrennt werden.
    Das Ergebnis von Proben mit hoher Autofluoreszenz kann durch den Abzug der Autofluoreszenz verbessert werden.

    Messungen können selbständig bzw. als Dienstleistung durch die Core Unit durchgeführt werden.

    Es ist die Bearbeitung folgender Proben möglich: S0, S1, S2. Es dürfen keine HIV-positiven oder Hepatitis-B oder -C positiven Proben gemessen werden. Daher müssen primäre humane Proben vorher darauf getestet werden oder die Proben müssen fixiert werden.

    Das Gerät ist mit folgenden Lasern ausgestattet:

    • 355 nm: UV-Laser
    • 405 nm: violetter Laser
    • 488 nm: blauer Laser
    • 561 nm: grüner Laser
    • 640 nm: roter Laser
    Außerdem verfügt es über einen Platereader.

Sorter (3)

  • Das Gerät ist mit folgenden Lasern ausgestattet:

    • 355 nm: UV Laser
    • 405 nm: violetter Laser
    • 488 nm: blauer Laser
    • 561 nm: grüner Laser
    • 637 nm: roter Laser
    Außerdem bietet es folgende neue Funktionen:

    • 6-fach Sortierung
    • spektrales Unmixing
    Der Sorter steht in einer Sterilwerkbank, so dass auch ungetestete humane Primärproben sortiert werden können.

  • Mehrfarbenkombination
    Lupe zum Vergrößern des Bildes
    Beispiele für Farbkombinationen bei einer Mehrfarbenanalyse.

    Das Gerät ist mit folgenden Lasern ausgestattet:

    • 355 nm: UV Laser
    • 405 nm: violetter Laser
    • 488 nm: blauer Laser
    • 561 nm: grüner Laser
    • 640 nm: roter Laser

  • FACS AriaIllu

    Mit diesem Zytometer können eine oder mehrere Zellpopulationen aus der Suspension heraussortiert werden (Achtung: nicht alle Zellen lassen sich gut sortieren, mitunter sind die Populationen sehr empfindlich). Die sortierten Zellen können weiter kultiviert werden.
    Das Cell Sorting am FACS AriaIIIu wird von Mitarbeiterinnen der Core Unit übernommen. Das Gerät ist mit folgenden Lasern ausgestattet:

    • 407 nm: violetter Laser
    • 488 nm: blauer Laser
    • 561 nm: grüner Laser
    • 633 nm: roter Laser

  • 1. Die Zellen werden durch einen Hüllstrom wie Perlen an einer Schnur aufgereiht (hydrodynamische Fokussierung)

    2. Im Laserschnittpunkt findet die Analyse der Zellen statt.

    3. Die Nozzle trennt den Strahl in einzelne Tropfen und lädt die zu sortierenden Tropfen auf.

    4. Die aufgeladenen Tropfen werden im elektrischen Feld abgelenkt und fallen in das entsprechende Auffanggefäß.

  • Die folgenden Tabellen zeigen, wie lange ein Sortiervorgang dauert. Dies sind Mindestzeiten, ca. 20 min müssen für die Einstellung des Geräts zugerechnet werden. Die Dauer variiert mit der Größe der Zellen.

    Sortdauer kleiner Zellen

    Sortdauer für kleine Zellen (15000/Sek., Modus: Yield)
    Sortdauer großer Zellen

    Sortdauer für große Zellen (5000/Sek., Modus: Yield)
  • Folgende Sortoptionen sind mit dem FACS AriaIIIu und FACS AriaFusion möglich:

    FACS 15 ml Tube

    1.) Auftrennung in bis zu 2 Populationen in 15 ml Röhrchen

    FACS Tubes
    FACS Reaktionsgefäße

    2.) Auftrennung in bis zu 4 Populationen in FACS-Röhrchen oder Reaktionsgefäßen mit Deckel

    96-well Sortierung

    3.) Ablage in Mikrotiterplatten (z.B. 96-Well)

Zugang, Sicherheit und Buchung

Vor dem Betreten der Labore ist die Teilnahme an der verpflichtenden S2 Sicherheitsunterweisung für unseren gentechnischen Anlagen erforderlich. Die Termine und auch Anmeldung zur Sicherheitsunterweisung sind in unserem Buchungssystem PPMS einzusehen und zu buchen.

Sämtliche Gerätebuchungen, Sicherheitsunterweisungen, Nutzerschulungen und die Abrechnung werden zentral über das PPMS-System verwaltet.

Die Analyzer können nach erfolgreicher Schulung und Bestätigung der Nutzungsbedingungen selbstständig verwendet werden.

Zellsortierungen werden als Service angeboten.

Bei der DFG registriert:

https://risources.dfg.de/

Serviceleistungen

  • Zellsortierung mit dem FACS AriaIIIu, FACS AriaFusion und S6SE
  • Sortierungen von ungetesteten humanen Proben und Bakterien (FACS AriaFusion)
  • Messungen mit dem LSR Fortessa-A3, Quanteon, LSR Fortessa und Aurora
  • Bestimmung von absoluten Zellzahlen am Quanteon
  • Messung und Auswertung von Zellzyklen am Quanteon
  • Am bildgebenden Durchflusszytometer Image Stream kann man hochauflösende Bilder mit quantifizierbaren Ergebnissen (angefärbte Marker) kombinieren.
  • Analyse von Vesikeln und Micro Partikeln am Image Stream
  • Bereitstellung von Auswertestationen zur selbständigen Nutzung mit folgender Software: DIVA, FlowJo, NovoExpress, Infinicyt und Ideas Software
  • Einarbeitung und Unterstützung neuer Nutzer:innen an den Analysegeräten zur selbständigen Anwendung
  • Schulung von Nutzer:innen mit langjähriger Durchlusszytometrie-Erfahrung an den Sortern FACS AriaIIIu, FACS AriaFusion und S6 zur selbständigen Nutzung
  • Messung neuster Fluoreszenzproteine durch Anschaffung neuer Filter möglich
  • Regelmäßige Lehrgänge zur Durchflusszytometrie in Zusammenarbeit mit den Geräteherstellern
  • Wissenschaftliche Unterstützung: Beratung bei der Erstellung eines neuen Panels und Hilfe bei der Auswertung z.B. mit FLOWJo (buchbar in PPMS unter Tasking: Scientific Consultation)

Servicepauschalen

Die Cytometry und Cell Sorting Core Facility steht allen Forscher:innen am UKE und Interessierten zur Nutzung offen.

Es fällt eine Nutzungspauschale per Nutzungsstunde an, die auf Grundlage der benötigten Verbrauchsmittel berechnet wurde. Vierteljährlich wird die Gesamtnutzungszeit für jede:n Nutzer:in ermittelt und wahlweise über Kostenstelle oder Drittmittel abgerechnet.
Die Nutzungspauschale für UKEler:innen beträgt (Stand September 2025):

  • Aurora 35 € pro Stunde
  • A3 (5 Laser) 25 € pro Stunde
  • LSR Fortessa (5 Laser) 25 € pro Stunde
  • Quanteon 24 € pro Stunde
  • LSR Fortessa (4 Laser) 22 € pro Stunde
  • AriaIII 60 € pro Stunde
  • AriaFusion 60 € pro Stunde
  • S6SE (Spectral) 60 € pro Stunde

Kontakt

Standort CF1 (N27)

  • Labor: Raum 00.068 + 068.1 > Tel. 52306 (beste Erreichbarkeit)
  • Büro: Raum 0.066 > Tel. 39677

Standort HCTI (N25)

  • Labor: Raum 04.2.022 + 023.2 > Tel. 50036
  • Büro: Raum 04.2.037 > Tel. 39644

Email

facs@uke.de

Anne Rissiek
Dr. rer. nat.
Anne Rissiek
  • Wissenschaftliche Leiterin
  • Cytometrie und Cell Sorting Core Unit
Regine Thiele
Regine Thiele
  • Technische Leitung
  • Cytometrie und Cell Sorting Core Unit
Melanie Lachmann-Schwemm
Melanie Lachmann-Schwemm
  • MTLA
  • Cytometrie und Cell Sorting Core Unit
Isabelle Höhenrieder
Isabelle Höhenrieder
  • BTA
  • Cytometrie und Cell Sorting Core Unit
Birgitta Maurer
Birgitta Maurer
  • MTLA
  • Cytometrie und Cell Sorting Core Unit