Cytometry und Cell Sorting Core Unit

Ziel der Cytomtetry und Cell Sorting Core Unit ist es, interessierten Wissenschaftlern:innen den Zugang zu modernsten Geräten der Durchflusszytometrie zu bieten:

  • 4 Analyzer ( LSR Fortessa-A3, Quanteon, LSR Fortessa, CantoII bis Ende 2024, Aurora ab Ende 2024)
  • 2 Sorter (AriaIIIu und AriaFusion)
  • 1 Imaging Analyzer (ImageStream)

Die Nutzung der Analyzer ist nach vorheriger Schulung und Anerkennung der Nutzungsbedingungen eigenverantwortlich möglich (wird auch als Dienstleistung angeboten). Die Bedienung des FACS AriaIIIu und des FACS AriaFusion erfolgt durch die Mitarbeiterinnen der Facility.

Falls Sie eine Einweisung, Unterstützung oder Beratung bei der Bedienung der Geräte benötigen, kontaktieren Sie uns gerne.

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Serviceleistungen

  • Zellsortierung mit dem FACS AriaIIIu oder FACS AriaFusion
  • Sortierungen von ungetesteten humanen Proben und Bakterien (FACS AriaFusion)
  • Messungen mit dem LSR Fortessa-A3, Quanteon, LSR Fortessa und FACS CantoII,
  • Bestimmung von absoluten Zellzahlen am Quanteon
  • Am bildgebenden Durchflusszytometer Image Stream kann man hochauflösende Bilder mit quantifizierbaren Ergebnissen (angefärbte Marker) kombinieren.
  • Analyse von Vesikeln und Micro Partikeln am Image Stream
  • Bereitstellung von Auswertestationen zur selbständigen Nutzung mit folgender Software: DIVA, FlowJo, NovoExpress, Infinicyt und Ideas Software
  • Einarbeitung und Unterstützung neuer Nutzer:innen an den Analysegeräten zur selbständigen Anwendung
  • Schulung von Wissenschaftler:innen mit langjähriger FACS-Erfahrung am FACS AriaIIIu und den FACS AriaFusion zur selbständigen Nutzung
  • Messung neuster Fluoreszenzproteine durch Anschaffung neuer Filter möglich
  • Regelmäßige Lehrgänge zur Durchflusszytometrie in Zusammenarbeit mit den Geräteherstellern

Zellanalyse

  • Um möglichst viel Information aus einer Probe zu erhalten, steht der LSR Fortessa-A3 als Highend-Durchflusszytometer in der Core Unit zur Verfügung. Das Gerät bietet zu den 3 Standardlasern noch einen gelb-grünen und einen UV-Laser. Es können bis zu 29 Farbstoffe in einer Probe verwendet werden. Messungen können selbständig bzw. als Dienstleistung durch die Core Unit durchgeführt werden.

    Es ist die Bearbeitung folgender Proben möglich: S0, S1, S2. Es dürfen keine HIV-positiven oder Hepatitis-B oder -C positiven Proben gemessen werden. Daher müssen primäre humane Proben vorher darauf getestet werden oder die Proben müssen fixiert werden.

    Das Gerät ist mit folgenden Lasern ausgestattet:

    • 355 nm: UV-Laser
    • 405 nm: violetter Laser
    • 488 nm: blauer Laser
    • 561 nm: grüner Laser
    • 633 nm: roter Lase

  • Der Quanteon ist mit 4 Lasern ausgestattet. Die Besonderheit, die dieses Gerät bietet ist die Bestimmung von absoluten Zellzahlen. Außerdem enthält die Software Programme zur Erstellung von Zellzyklus- und Proliferationsanalysen. Dieser kann für Messungen mit einfachen Farbkombinationen selbstständig oder als Dienstleistung durch die Core Unit genutzt werden.

    Es ist die Bearbeitung folgender Proben möglich: S0, S1, S2. Es dürfen keine HIV-positiven oder Hepatitis-B oder -C positiven Proben gemessen werden. Daher müssen primäre humane Proben vorher darauf getestet werden oder die Proben müssen fixiert werden.

    Das Gerät ist mit folgenden Lasern ausgestattet:

    • 405 nm: violetter Laser
    • 488 nm: blauer Laser
    • 561 nm: gelb-grüner Laser
    • 637 nm: roter Laser

  • FACS LSR Fortessa

    Zur Erweiterung des Messspektrums steht der LSR Fortessa als Durchflusszytometer in der Core Unit zur Verfügung. Das Gerät bietet zusätzlich einen gelb-grünen Laser an, wodurch eine bessere Detektion bei der Verwendung von PE-Farbstoffen und roten Fluoreszenzproteinen möglich ist. Es können bis zu 17 Farbstoffe in einer Probe verwendet werden. Messungen können selbständig bzw. als Dienstleistung durch die Core Unit durchgeführt werden.

    Es ist die Bearbeitung folgender Proben möglich: S0, S1, S2. Es dürfen keine HIV positiven oder Hepatitis-B oder -C positiven Proben gemessen werden. Daher müssen primäre humane Proben vorher darauf getestet werden oder die Proben müssen fixiert werden.

    Das Gerät ist mit folgenden Lasern ausgestattet:

    • 405 nm: violetter Laser
    • 488 nm: blauer Laser
    • 561 nm: grüner Laser
    • 640 nm: roter Laser

  • FACS Canto II

    In der Core Unit ist der FACS Canto mit 3 Lasern ausgestattet. Dieser kann für Messungen mit einfachen Farbkombinationen selbstständig oder als Dienstleistung durch die Core Unit genutzt werden.

    Es ist die Bearbeitung folgender Proben möglich: S0, S1, S2. Es dürfen keine HIV positiven oder Hepatitis-B oder -C positiven Proben gemessen werden. Daher müssen primäre humane Proben vorher darauf getestet werden oder die Proben müssen fixiert werden.

    Das Gerät ist mit folgenden Lasern ausgestattet:

    • 407 nm: violetter Laser
    • 488 nm: blauer Laser
    • 633 nm: roter Laser

Zellsortierung

  • 1. Die Zellen werden durch einen Hüllstrom wie Perlen an einer Schnur aufgereiht (hydrodynamische Fokussierung)

    2. Im Laserschnittpunkt findet die Analyse der Zellen statt.

    3. Die Nozzle trennt den Strahl in einzelne Tropfen und lädt die zu sortierenden Tropfen auf.

    4. Die aufgeladenen Tropfen werden im elektrischen Feld abgelenkt und fallen in das entsprechende Auffanggefäß.

  • Die folgenden Tabellen zeigen, wie lange ein Sortiervorgang dauert. Dies sind Mindestzeiten, ca. 20 min müssen für die Einstellung des Geräts zugerechnet werden. Die Dauer variiert mit der Größe der Zellen.

    Sortdauer kleiner Zellen

    Sortdauer für kleine Zellen (15000/Sek., Modus: Yield)
    Sortdauer großer Zellen

    Sortdauer für große Zellen (5000/Sek., Modus: Yield)
  • Beispiele für Farbkombinationen für eine Mehrfarbanalysen

  • Folgende Sortoptionen sind mit dem FACS AriaIIIu und FACS AriaFusion möglich:

    FACS 15 ml Tube

    1.) Auftrennung in bis zu 2 Populationen in 15 ml Röhrchen

    FACS Tubes
    FACS Reaktionsgefäße

    2.) Auftrennung in bis zu 4 Populationen in FACS-Röhrchen oder Reaktionsgefäßen mit Deckel

    96-well Sortierung

    3.) Ablage in Mikrotiterplatten (z.B. 96-Well)

  • FACS AriaIllu

    Mit diesem Zytometer können eine oder mehrere Zellpopulationen aus der Suspension heraussortiert werden (Achtung: nicht alle Zellen lassen sich gut sortieren, mitunter sind die Populationen sehr empfindlich). Die sortierten Zellen können weiter kultiviert werden.
    Das Cell Sorting am FACS AriaIIIu wird von Mitarbeiterinnen der Core Unit übernommen. Das Gerät ist mit folgenden Lasern ausgestattet:

    • 407 nm: violetter Laser
    • 488 nm: blauer Laser
    • 561 nm: grüner Laser
    • 633 nm: roter Laser

  • Mehrfarbenkombination
    Lupe zum Vergrößern des Bildes
    Beispiele für Farbkombinationen bei einer Mehrfarbenanalyse.

    Das Gerät ist mit folgenden Lasern ausgestattet:

    • 355 nm: UV Laser
    • 405 nm: violetter Laser
    • 488 nm: blauer Laser
    • 561 nm: grüner Laser
    • 640 nm: roter Laser

Weitere Ausstattung

  • Technische Informationen:

    Laser:
    - 488 nm blue laser (high-power)
    - 642 nm red laser
    - 785 nm far red laser
    - 375 nm UV laser
    - 405 nm violet laser
    - 561 nm green laser

    Geschwindigkeit:
    - bis zu 200 events pro Sekunde

    Objektive
    -20x, 40x und 60x Vergrößerung

    Probencharakteristika:
    - Volumen: 20-200yl
    - Utilization efficiency: bis zu 95%

Anmeldung

Die Cytometry und Cell Sorting Core Unit steht allen Forscher:innen am UKE und Interessierten zur Nutzung offen. Die Buchung erfolgt über das bereitgestellte Internetbuchungssystem. Neue Nutzer:innen wenden sich bitte direkt an die angegebenen Kontaktpersonen.

Es fällt eine Nutzungspauschale per Nutzungsstunde an, die auf Grundlage der benötigten Verbrauchsmittel berechnet wurde.
Die Nutzungspauschale für UKEler:innen beträgt (Stand April 2023):

  • FACS LSR Fortessa-A3: 25 € pro Stunde
  • Quanteon: 24 € pro Stunde
  • FACS LSR Fortessa: 22 € pro Stunde
  • FACS CantoII: 17 € pro Stunde
  • FACS AriaIII: 60 € pro Stunde
  • FACS AriaFusion: 60 € pro Stunde
  • Image Stream: 55 € pro Stunde
Es wird vierteljährlich die Gesamtnutzungszeit für jede:n Nutzer:in ermittelt und wahlweise über Kostenstelle oder Drittmittel abgerechnet.. Beachten Sie bitte die Nutzungsordnungen für die einzelnen Geräte.

Kontakt

Standort:

N27 (Campus Forschung)
4. Etage Raum 61.1

Regine Thiele
  • Core Managerin
  • Cytometrie und Cell Sorting Core Unit
Melanie Lachmann-Schwemm
  • Stellvertretende Leitung
  • Cytometrie und Cell Sorting Core Unit
Isabelle Höhenrieder
  • BTA
  • Cytometrie und Cell Sorting Core Unit
Andrea Knoke
  • Technische Angestellte
  • Cytometrie und Cell Sorting Core Unit