Vector Facility
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Um Erbgut gezielt in Zellen zu schleusen und die genetischen Ursachen von Krankheiten im Labor zu untersuchen, bieten sich Viruspartikel als Gen-Fähren an. Dabei werden virale Gensequenzen durch die Fremd-DNA von Interesse ersetzt und in das virale Capsid eingepackt. Die viralen Hüllproteine bestimmen dabei den Serotyp und auch die Spezifität für unterschiedliche Gewebe bzw. Zellen. Die Replikationsmaschinerie der rekombinanten Viruspartikel ist zur Gewährleistung der größtmöglichen Sicherheit für die/den Anwender/in so modifiziert, dass lediglich eine einmalige Transduktion der Zielzelle zur Einschleusung des Transgens erfolgt, so dass das Gen in der Zelle ausgepackt und aktiviert wird, aber keine Vermehrung von Viren erfolgen kann.
Rekombinante Viruspartikel können für Funktionsstudien genutzt werden, in deren Rahmen entweder ein "knock-in" (bzw. "rescue" eines knock-outs) durch rekombinante Expression eines Transgens vermittelt wird, oder aber ein endogenes Protein durch RNA-Interferenz z.B. mittels short interfering RNA (shRNA) herunter reguliert wird.
Die Vektor Core Unit, die wissenschaftlich mit dem Institut für Experimentelle Pharmakologie und Toxikologie assoziiert ist, unterstützt Wissenschaftler/innen bei der Auswahl und der Etablierung des geeigneten Virussystems für ihre Forschung. Je nach Anforderung an die Größe des zu verpackenden Gens, die Zell- bzw. Gewebespezifität des Transfers in vitro oder in vivo bieten sich unterschiedliche Virustypen an. Darüber hinaus muss die Stabilität und Persistenz der Genexpression sowie die erforderlichen Virusmengen mit dem Umfang und der Dauer der durchzuführenden Studie abgestimmt werden.
Viral vectors: gene therapy properties
Dr. Ingke Braren
Haus N30, Institut für Experimentelle Pharmakologie und Toxikologie
Tel: (040) 7410- 59196
Fax: (040) 7410- 59499
i.braren(at)uke.de
Dr. Michaela Miehe
Haus N30, Institut für Experimentelle Pharmakologie und Toxikologie
Tel: (040) 7410- 59196
Fax: (040) 7410- 59499
m.miehe(at)uke.de
Evelyn Bendrat
Haus N30, Institut für Experimentelle Pharmakologie und Toxikologie
Tel: (040) 7410- 59196
Fax: (040) 7410- 59499
e.bendrat(at)uke.de
Ab 2011 wird zunächst die Produktion Adeno-assoziierter Viruspartikel (AAV) unterschiedlicher Serotypen angeboten. Das Transgen bzw. die shRNA von bis zu 4.6 kb Länge wird zunächst in einen Transfervektor kloniert und anschließend von der Vektor Facility für die Produktion mittels HEK-293-Zellen und Reinigung der Viruspartikel genutzt. Dieser Virustyp kann unter der Gentechnik-Sicherheitsstufe S1 gehandhabt werden.
Im Laufe des Jahres werden darüber hinaus weitere Systeme zur Virusproduktion etabliert, die durch ihre jeweils unterschiedlichen Charakteristika das Anwendungsspektrum ergänzen.
Es steht Equipment für molekularbiologische und proteinchemische Arbeiten zur Verfügung.
Die Vektor Facility steht allen Forschern/-innen am UKE und Interessierten zur Nutzung offen. Bitte wenden Sie sich für weitere Informationen per Email an die Kontaktadresse (i.braren@uke.de) und beachten Sie die Nutzungsordnung der Facility.
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