FACS Sorting Core Unit
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Ziel der FACS Sorting Core Unit ist es, interessierten Wissenschaftlern/-innen den Zugang zu modernsten Geräten der Durchflusszytometrie zu bieten und sie mit wissenschaftlicher Expertise bei ihren jeweiligen Fragestellungen zu unterstützen. Angesiedelt in der Interdiziplinären Klinik für Stammzelltransplantation stehen in der Unit hierzu drei hochwertige Geräte zur Analyse (FACS CantoII und FACS LSR Fortessa) bzw. zur Sortierung (FACS AriaIII) zur Verfügung.
Die Nutzung des FACS CantoII und des LSR Fortessas ist nach vorheriger Schulung und Anerkennung der Guidelines eigenverantwortlich möglich. Die Bedienung des FACS AriaIII erfolgt durch die Mitarbeiterinnen der Facility.
Falls Sie Expertenunterstützung und -beratung benötigen, kann diese gerne bei verfügbarer Kapazität erteilt werden. Bitte wenden Sie sich in diesem Fall mit Ihrer Anfrage per mail an die FACS Sorting Core Unit (facs(at)uke.de).
Dipl. Ing. Regine Thiele
Core Managerin
Tel.: 040 7410 52306
Email: facs(at)uke.de
Melanie Lachmann
Tel.: 040 7410 52306
Email: facs(at)uke.de
Constanze Siggel
Tel.: 040 7410 52306
Email: facs(at)uke.de
Tanja Sonntag
Tel.: 040 7410 52306
Email: facs(at)uke.de
Standort:
N27 (Campus Forschung)
4. Etage Raum 61.1
Universitätsklinikum Hamburg-Eppendorf
FACS Sorting Core Unit
Interdisziplinäre Klinik und Poliklinik für Stammzellforschung
Martinistr. 52
20246 Hamburg
Mit dem FACS CantoII können FACS Messungen selbständig bzw. durch die Core Facility Mitarbeiterinnen durchgeführt werden.
Das Gerät ist mit folgenden Lasern ausgestattet:
Übersicht über die Filterkonfiguration des FACS CantoII (PDF).
Der LSR Fortessa erweitert als neues Durchflusszytometer die FACS Sorting Core Unit. Das Gerät bietet zusätzlich zu dem blauen, violetten und roten Laser einen gelb-grünen Laser zur besseren Detektion bei der Verwendung von PE-Farbstoffen und Fluoreszenzen. Es können bis zu 15 Farbstoffe in einer Probe verwendet werden.
Mit dem FACS LSR Fortessa können FACS Messungen selbständig bzw. durch die Core Facility Mitarbeiterinnen durchgeführt werden.
Das Gerät ist mit folgenden Lasern ausgestattet:
Übersicht über die Filterkonfiguration des LSR Fortessa (PDF).
Mit diesem Zytometer können eine oder mehrere Zellpopulationen aus der Suspension heraussortiert weden (Achtung: nicht alle Zellen lassen sich gut sortieren, mitunter sind die Populationen sehr empfindlich). Die sortierten Zellen können weiter kultiviert werden.
Das Cell Sorting am FACS AriaIII wird von Mitarbeiterinnen der Core Unit übernommen.
Das Gerät ist mit folgenden Lasern ausgestattet:
Übersicht über die Filterkonfiguration des AriaIII (PDF)
Die folgende Tabelle zeigt mögliche Beispiele von Farbkombinationen für eine Mehrfarbenanalyse:
2.1 Sorting am FACS AriaIII
1. Die Zellen werden durch einen Hüllstrom wie Perlen an einer Schnur aufgereiht (hydronamische Fokussierung)
2. Im Laserschnittpunkt findet die Analyse der Zellen statt.
3. Die Nozzel trennt den Strahl in einzelne Tropfen und lädt die sortierenden Tropfen auf.
4. Die aufgeladenen Tropfen werden im elektrischen Feld abgelenkt und fallen in das entprechende Auffanggefäß.
Die folgenden Tabellen zeigen, wie lange ein Sortiervorgang dauert. Dies sind Mindestzeiten, ca. 20 min müssen für die Einstellung des Geräts zugerechnet werden.
Große Zellen (5000/sec, Modus: Yield)
Kleine Zellen (15000/sec, Modus: Yield)
2.3 Sortoptionen
Folgende Sortoptionen sind mit dem FACS AriaIII möglich:
1.) Auftrennung in bis zu 4 Populationen in FACS-Röhrchen bzw. 2 Populationen in 15 ml Röhrchen
2.) Ablage in Mikrotiterplatten (z.B. 96-Well)
3.) Ablage auf Objektträger
2.4. Nutzungshinweise
Die FACS Sorting Core Unit steht allen Forschern/-innen am UKE und Interessierten zur Nutzung offen. Die Buchung erfolgt über das bereitgestellte Internetbuchungssystem. Neue Nutzer wenden sich bitte direkt an die angegebenen Kontaktpersonen.
Es fällt eine Nutzungspauschale per Nutzungsstunde an, die auf Grundlage der benötigten Verbrauchsmittel berechnet wurde.
Die Nutzungspauschale beträgt (Stand 12/2011):
Es wird vierteljährlich die Gesamtnutzungszeit für jeden Nutzer ermittelt und auf volle Stundenzahl abgerundet.
Beachten Sie bitte die Nutzungsordnungen für die einzelnen Geräte.
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